和记娱乐中国率先推出遗传毒性杂质NMBA（N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸）LC-MS/MS解决方案
2020-07-092019年3月1日，美国食品和药物管理局(FDA)在官网发布血管紧张素II受体阻滞剂（ARBs）药物氯沙坦的自愿召回公告，涉及到印度Hetero Labs Ltd.生产的87批氯沙坦钾片，而导致该召回的主要原因是发现其中含有N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）杂质。由于NMBA是已知动物和潜在人类的致癌化学物质，是继N−亚硝基二甲胺（NDMA）和N−亚硝基二乙胺（NDEA）之后上市ARBs药物中检测到的第三种亚硝胺类遗传毒性杂质。此后，FDA相继公布了Teva Pharmaceuticals和Vivimed Life Sciences Pvt Ltd等制药公司自愿召回涉及氯沙坦钾的63批药品，其原因为检出含有NMBA。同时，加拿大卫生部（HC）及英国卫生部（DHSC）也在官网上发布了氯沙坦类药物的召回公告。直至2019年6月12日，Teva Pharmaceutical🌟s仍在扩大自愿召回7批检出NMBA氯沙坦钾片，可见药物中的遗传毒性杂质仍受到公众及药品监管机构的高度关注。
在FDA已公布的ARBs药物亚硝胺杂质限度表中，NMBA的日🎀允许摄入量最大值为0.96ppm。 FDA评估了暴露于9.82ppm水平NMBA相比于终生暴露于0.96𓃲ppm NMBA的服药水平，表明6个月的暴露量不会存在患癌风险。
N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）
N-Nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid(NMBA)
CAS. 61445-55-4
因此，为了确保患者在缓🍨冲期可获得氯沙坦类药物，FDA不反对含NMBA低于9.82ppm的氯沙坦保持销售。该过渡缓冲期FDA设为6个月，直至生产企业提供亚硝胺杂质符合要求的氯沙坦药物来填补市场。
目前，关于氯沙坦钾中NMBA的检测方法尚未见公开报道，为及时应对市场检测需求，和记娱乐中国率先推出了基于LC-MS/MS技术的检测方法，该方法操作简单，灵敏度高，适用性强，可有效用于氯沙坦钾中NMBA的分析检测。
1、 实验部分
1.1 仪器： LCMS-8050三重四极杆质谱仪联用仪，含有：LC-30AD×2输液泵，DGU-20A5R在线脱气机，SIL-30AC自动进样器，CTO-30A柱温箱，C🌺BM-20A系统控制器，LCMS-8050三重四极杆质谱仪，LabSol🍨utions（Version 5.82 SP1）色谱工作站。
1.2 分析条件：
液相色谱条件
| 色 谱 柱 | ：Shim-pack XR-ODS II 2.0 mm I.D.× 100 mm L., 2.2 μm | ||
| 流 动 相 | ：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇 | ||
| 流 速 | ：0.3 mL/min | 柱温 | ：40℃ |
| 进样体积 | ：2 µL | 洗脱方式 | ：梯度洗脱 |
质谱条件
| 离子化模式 | ：ESI，正离子检测 | 碰撞气 | ：氩气 270 kPa |
| 雾化气流速 | ：3.0 L/min | 加热模块温度 | ：400℃ |
| 加热气流速 | ：10.0 L/min | 干燥气流速 | ：10.0 L/min |
| 接口温度 | ：300℃ | 扫描模式 | ：多反应监测(MRM) |
| DL温度 | ：250℃ | MRM参数 | ：见下表 |
1.3 标准品溶液：取NMBA标准贮备液，以纯甲醇逐级稀释为🌊0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/mL的八个不同浓度的混合标准工作溶液。
1.4 样品溶液：取氯沙坦钾三批原料药（符合EP9.0）0.1 g于𒆙10 🌄mL容量瓶中，加甲醇适量，超声1 min至全部溶解，放冷至室温，用甲醇定容待测。
2、 结果
2.1标准品色谱图
图1. NMBA标准品色谱图（100 ng/mL）
（黑色-总离子流；粉色-MRM147.15𓆏/117.10；蓝色💖-MRM147.15/87.10；棕色-MRM147.15/44.10）
2.2 线性关系及检出定量限
图2. NMBA标准曲线
检出限（LOD）0.5 ng/mL(MღRM147.15/117.10)，定量限（LOQ）1.0 ng/mL (MRM147.15🍃/117.10)
2.3 精密度实验：10 ng/mL标准溶液为样本连续进样，日内及日间保留时间相对标准偏差低于𒀰0.1%ꦑ，峰面积低于1.10%。
2.4 加标回收实验
取0.1 g氯沙坦钾样品于10 mL容量瓶中，加入NMBA标准品溶液(相当于50、100、200 ng NMBA标准品)，按照1.4中🌳的方法进行处理，上机分析。加标的氯沙坦钾ꦉ溶液色谱图（以200 ng加标量为例）见图3。三个平行样品的低中高平均回收率分别为98.04%，94.40%，95.61%。
图3 NMBA加标量为200 ng时氯沙坦钾溶液色谱图
2.5 检测结果：三批样品中NMBA均低于最小检出限（LOD）。
3、 结论
本工作建立了使用LCMS-8050三重四极杆质谱联用仪测定氯沙坦钾原料药中N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）杂质的方法♚，在0.5~100 ng/mL浓度范围内线性关系良好，检出限和定量限分别为0.5 ng/mL和1.0 ng/mL。使用此方法对三批次氯沙坦钾原料药进行了测定，结𒅌果为NMBA未检出。本方法简单、快速、灵敏、准确，可有效用于氯沙坦钾原料药中NMBA的分析检测。
